Expressió de proteïnes

Serveis

• Clonació HTP personalitzada per generar vectors d’expressió
  La tècnica de clonació independent de l’enzim de restricció i lligament In-Fusion™ permet la producció precisa de construccions definides per l’usuari, inclosa la producció de construccions mutants, quimèriques i bicistròniques (només E. coli). Hi ha molts pOPIN1 o pPEU In-Fusion™ – vectors preparats disponibles – feu clic aquí per descarregar la llista més recent o poseu-vos en contacte amb nosaltres. La majoria d’aquests vectors permeten l’expressió en E.coli (promotors basats en T7), cèl·lules de mamífers (potenciador precoç immediat de CMV fusionat amb el promotor de ß-actina de pollastre) o cèl·lules d’insectes (promotor p10 i recombinació intracel·lular dels ORF 603 i 1629). amb genoma baculoviral). En general, s’espera que l’investigador proporcioni la “plantilla” per a les operacions de clonació, però la instal·lació també pot obtenir plasmidis o ADNc.
• Cribratge d’expressió en E. coli
  Es pot examinar una placa de microtitulació de 96 clons d’expressió (instal·lacions o derivats de l’usuari) a E. coli en aproximadament una setmana. Actualment, la pantalla consisteix en l’ús de dues soques d’expressió, amb l’expressió en cada soca que s’està provant mitjançant mètodes IPTG i d’autoinducció. Es poden incorporar soques d’E. coli addicionals (DE3) al procés de cribratge si cal.
• Minipreparació del plasmidi HTP: 96 minipreparacions de pellets d’E. coli en format MTP en menys de dues hores
• Expressió de proteïnes personalitzades i purificació de proteïnes intracel·lulars o secretades a escala de mil·ligrams
  Un mínim de dos passos de purificació generalment ens proporcionen pureses de proteïnes superiors al 95% per a la majoria de proteïnes. Els hostes disponibles actualment per a cultius d’expressió a gran escala són cèl·lules E. coli i HEK293T i actualment estem introduint cultius de cèl·lules d’insectes a gran escala a la nostra llista de serveis. El sistema de cèl·lules HEK293T s’ha utilitzat per produir amb èxit quantitats de mil·ligrams de proteïnes glicosilades secretades.
• Producció de proteïnes marcades amb seleno-metionina en soques d’E.coli auxotròfiques o prototròfiques per a la determinació de l’estructura cristal·logràfica
  La nostra compra a granel de seleno-metionina produeix preus molt competitius per a les nostres proteïnes marcades d’E.coli.
• Producció de proteïnes marcades amb 15N, 13C o deuteri en soques d’E.coli auxòtròfiques o prototròfiques per a RMN
• Cribratge d’expressió en cèl·lules de mamífers (p. ex. HEK293T).
  Una placa de microtitulació de 96 clons d’expressió (derivats de la instal·lació o de l’usuari) es poden examinar a les cèl·lules en 1-2 setmanes.
• Producció de baculovirus recombinants mitjançant les suites vectorials pOPIN o pPEU o a partir de construccions existents (per exemple, pFastBac). La recombinació a la cèl·lula (Sf9) dels vectors pOPIN i pPEU amb el genoma baculoviral és ràpida i sense fons.
• Les proteases recombinants 3C (PreScission), TEV i SUMO etiquetades amb his estan disponibles per a l’eliminació dels “partners” de fusió de les proteïnes expressades.

També esperem que les glicosidases recombinants PNGasa i EndoF1 estiguin disponibles per a l’eliminació de fragments de sucre de proteïnes recombinants glicosilades abans de la cristal·lització. La instal·lació també obté molts reactius d’alta qualitat, que van des de soques de cèl·lules especialitzades competents en E. coli i reactius per a l’expressió de proteïnes fins a reactius d’etiquetatge i clonació per a l’ús d’investigadors individuals. La compra de reactius a través de les instal·lacions és generalment molt rendible.