Citometria
GINYS-IGTP-002
Plataforma de Citometria
Planta Baixa IGTP Edifici Mar
Institut de Recerca Germans Trias i Pujol (IGTP)
Crta. de Can Ruti – camí de les escoles, s/n
08916 Badalona, Barcelona, Spain
Planta Baixa IGTP Edifici Mar
Institut de Recerca Germans Trias i Pujol (IGTP)
Crta. de Can Ruti – camí de les escoles, s/n
08916 Badalona, Barcelona, Spain
La plataforma de Citometria va ser creada l'any 1999 com a servei de suport a la recerca dins de l'Institut de Recerca Germans Trias i Pujol, al campus Can Ruti, a Badalona. Addicionalment, també dona servei de diagnòstic clínic en Immunologia a l'Hospital Germans Trias i Pujol i imparteix anualment cursos de formació en citometria de flux.
La plataforma proporciona serveis de separació cel·lular, anàlisi i adquisició en citòmetre de flux analitzador, consultoria i formació.
Des de febrer de 2006, la plataforma de Citometria s'ubica a la planta baixa de l’edifici Mar de l’IGTP. Consta de 64 m2, distribuïts en un laboratori exclusiu per l'ús del separador cel·lular i un espai dedicat als citòmetre de flux analitzadors, així com una zona d'ordinadors per anàlisi off-line. Durant el primer trimestre del 2023 està prevista la construcció d'un nou espai de biocontenció nivell 2 avançat per a la maipulació i l'anàlisi de mostres infeccioses de nivell 2-3
Serveis
Separació cel·lular
Els citòmetres de flux separadors (FACSAria II) permeten separar cèl·lules en funció de paràmetres prèviament definits per l’operador. Per a purificar diferents poblacions cel·lulars, la citometria de flux està especialment dissenyada per aplicacions que requereixin una alta puresa de recol·lecció. La utilització de múltiples fluorocroms simultàniament permet classificar i separar subpoblacions cel·lulars en funció de l’expressió de diferents propietats cel·lulars.
La preparació de l’experiment de separació cel·lular exigeix una sèrie de passos previs a la seva realització que s’han de concretar amb antelació amb el responsable de la Plataforma de Citometria.
Adquisició i anàlisi amb citòmetre de flux analitzador
BD FACSCanto II, BD FACSLyric, BD LSR Fortessa i Aurora Cytek (espectral) són els citòmetres analitzadors de què l’usuari pot disposar per a realitzar diferents estudis. Aquests equips poden ser utilitzats directament per l’usuari, ja sigui acreditant experiència en el maneig d’aquests equips o mitjançant un curs previ per part del personal de la plataforma de Citometria.
Anàlisi offline a entorn Mac/Windows amb software FACSDiva i FlowJo, compensació offline i escales “Logicle” o biexponencials i ModFit.
Formació
Disseny de cursos personalitzats. Anualment es realitzen a l’IGTP diversos cursos sobre fonaments i aplicacions en citometria de flux.
Consultoria
La plataforma de Citometria posa a disposició dels usuaris un servei de consultoria en qüestions relacionades amb la citometria de flux.
Equipament
Separació Cel·lular
- Separador Cel·lular FACSAria II (BD Biosciences)
Tres làsers (405, 488 i 633 nm), quinze detectors (tretze fluorescències i dos paràmetres de dispersió de llum). ACDU (Automated Cell Deposition Unit) per a separació en diferents tipus de plaques de pous i slides; opció single cell. Opcions instal·lades: sistema d’evacuació d’aerosols (AMO) i control de temperatura per bany refrigerat. Software FACSDiva.
- Citòmetres de flux analitzadors
- Citòmetre de Flux LSRFortessa SORP (BD Biosciences)
Equipat amb làser blau d’estat sòlid (488nm), làser vermell He-Ne (640 nm), làser violeta (405 nm) i làser verd (532 nm), permet treballar amb 18 fluorescències i 2 paràmetres de dispersió (FSC i SSC), analitzant per a cadascun l’àrea, alçada i amplada del pols elèctric. Processament de senyals digital, adquisició i anàlisi amb software FACSDiva. Sistema HTS per l’adquisició de mostres amb plaques de 96 pous.
Citometria espectral d’alta dimensió
- Separador Cel.lular FACSLyric (BD Biosciences)
Equipat amb làser blau d’estat sòlid (488nm), làser vermell He-Ne (633 nm) i làser violeta (405 nm), permet treballar amb deu fluorescències i dos paràmetres de dispersió (FSC i SSC). Sistema de processament de senyals digital amb software BD FACSSuite. Equipat amb carregador de mostres automatitzat per a tubs i plaques de 96 pous.
- Citòmetre de Flux FACSCanto II (BD Biosciences)
Equipat amb làser blau d’estat sòlid (488nm), làser vermell He-Ne (633 nm) i làser violeta (405 nm), permet treballar amb vuit fluorescències i dos paràmetres de dispersió (FSC i SSC). Sistema de processament de senyals digital amb software FACSDiva. Equipat amb carregador de mostres automatitzat per tubs (Loader).
- Luminex® 200 (Luminex Corp.)
El sistema Luminex® 200 és un analitzador basat en els principis de la citometria de flux. Luminex® 200 estableix l’estàndard per a la multiplexació i ofereix la capacitat de realitzar fins a 100 proves diferents en un sol volum de reacció i utilitzar beads magnètics o de poliestirè. Obté un gran rendiment de mostra amb un temps de lectura de placa de 96 gerres de només 45 minuts.
Programes per anàlisi off-line
Software
FlowJo, FACSDiva i CellQuestPro instal.lat a un ordinador iMac 27″ Intel i7 16 GB RAM amb sistemes MAC OSX i Windows (XP i 7).
Citometria espectral d’alta dimensió
Aurora 5-laser (Cytek Biosciences)
Instal·lat el maig de 2020, està configurat amb cinc làsers (355, 405, 488, 561 i 640 nm), tres paràmetres de dispersió i 64 canals de fluorescència. L’Aurora permet dades d’alta dimensió amb panells dissenyats (40 colors simultàniament i més enllà). Equipat amb un sistema automàtic de micro-mostreig (AMS) per a l’adquisició d’alt rendiment amb plaques de 96 pous. Adquisició de dades amb el programari SpectroFlo. Anàlisi de dades amb aplicació d’algoritmes de reducció dimensional i clusterització amb plataformes on-line OMIQ i Cytobank.
Publicacions
High-Dimensional Immunophenotyping with 37-Color Panel Using Full-Spectrum Cytometry
Methods Mol Biol. 2022;2386:43-60.
Methods Mol Biol. 2022;2386:43-60.
