Expresión de proteínas

Servicios

• Clonación HTP personalizada para generar vectores de expresión
  La técnica de clonación independiente de la enzima de restricción y ligamento In-Fusion™ permite la producción precisa de construcciones definidas por el usuario, incluida la producción de construcciones mutantes, quiméricas y bicistrónicas (sólo E. coli). Hay muchos pOPIN1 o pPE In-Fusion™ – vectores listos disponibles – haga clic aquí para descargar la lista más reciente o póngase en contacto con nosotros. La mayoría de estos vectores permiten la expresión en E.coli (promotores basados ​​en T7), células de mamíferos (potenciador precoz inmediato de CMV fusionado con el promotor de ß-actina de pollo) o células de insectos (promotor p10 y recombinación intracelular de los ORF 603 y 1629). con genoma baculoviral). Por lo general, se espera que el investigador proporcione la «plantilla» para las operaciones de clonación, pero la instalación también puede obtener plásmidos o ADNc.
• Cribado de expresión en E. coli
  Se puede examinar una placa de microtitulación de 96 clones de expresión (instalaciones o derivados del usuario) en E. coli en aproximadamente una semana. Actualmente, la pantalla consiste en el uso de dos cepas de expresión, con la expresión en cada cepa que se está probando mediante métodos IPTG y de autoinducción. Se pueden incorporar cepas de E. coli adicionales (DE3) en el proceso de cribado si es necesario.
• Minipreparación del plásmido HTP: 96 minipreparaciones de pellets de E. coli en formato MTP en menos de dos horas
• Expresión de proteínas personalizadas y purificación de proteínas intracelulares o secretadas a escala de miligramos
  Al menos dos pasos de purificación generalmente nos proporcionan purezas de proteínas superiores al 95% para la mayoría de proteínas. Los huéspedes disponibles actualmente para cultivos de expresión a gran escala son células E. coli y HEK293T y actualmente estamos introduciendo cultivos de células de insectos a gran escala en nuestra lista de servicios. El sistema de células HEK293T se ha utilizado para producir con éxito cantidades de miligramos de proteínas glicosiladas secretadas.
• Producción de proteínas marcadas con seleno-metionina en cepas de E.coli auxotróficas o prototróficas para la determinación de la estructura cristalográfica
  Nuestra compra a granel de seleno-metionina produce precios muy competitivos para nuestras proteínas marcadas de E.coli.
• Producción de proteínas marcadas con 15N, 13C o deuterio en cepas de E.coli auxótróficas o prototróficas para RMN
• Cribado de expresión en células de mamíferos (p. ej. HEK293T).
  Una placa de microtitulación de 96 clones de expresión (derivados de la instalación o del usuario) se pueden examinar en las células en 1-2 semanas.
• Producción de baculovirus recombinantes mediante las suites vectoriales pOPIN o pPEU oa partir de construcciones existentes (por ejemplo, pFastBac). La recombinación en la célula (Sf9) de los vectores pOPIN y pPEU con el genoma baculoviral es rápida y sin fondo.
  Las proteasas recombinantes 3C (PreScission), TEV y SUMO etiquetadas con his están disponibles para la eliminación de los «partners» de fusión de las proteínas expresadas.

También esperamos que las glicosidasas recombinantes PNGasa y EndoF1 estén disponibles para la eliminación de fragmentos de azúcar de proteínas recombinantes glicosiladas antes de la cristalización. La instalación también obtiene muchos reactivos de alta calidad, que van desde cepas de células especializadas competentes en E. coli y reactivos para la expresión de proteínas hasta reactivos de etiquetado y clonación para su uso de investigadores individuales. La compra de reactivos a través de las instalaciones es generalmente muy rentable.