Espectrometría de masas y proteómica

Equipos

• Orbitrap Eclipse (Thermo Scientific) (NUEVO 2021)La capacidad de la instalación se fortaleció significativamente con la adquisición de un espectrómetro de masas tríbrido de nueva generación que incluye un cuadrupolo, una trampa de iones lineal y un analizador de masas Orbitrap. Este instrumento permite múltiples técnicas de fragmentación (CID, HCD y ETD) durante cualquier etapa de MSn, con análisis de masas posteriores en el analizador de masas con trampa de iones o Orbitrap.

  El instrumento aprovecha la combinación de una fuente de iones más brillante que los instrumentos Orbitrap anteriores, con un tubo de transferencia de mayor capacidad y un embudo de iones electrodinámico para una mayor sensibilidad. Cuenta con una guía avanzada de haz de iones activos para una mayor robustez, un cuadrupolo segmentado y una mejor transmisión de iones y rendimiento de ETD.

  La tecnología de vacío avanzada permite ajustar el vacío en la celda IRM para mejorar la transmisión de iones y S/N para proteínas intactas, así como para su fragmentación.

  Este instrumento se utiliza en las aplicaciones más exigentes de la proteómica, tanto en enfoques de arriba hacia abajo como de abajo hacia arriba. Se utiliza acoplado a dos sistemas nanoLC según el enfoque de MS: un sistema Dionex Ultimate 3000 nanoLC (Thermo) o un NanoAcquity UPLC de Waters. En ambos casos se utiliza una interfaz nanoESI basada en chip (Advion Triversa Nanomate).

• Evosep One (Nuevo 2021)El cromatógrafo Evosep One, que utilizamos acoplado al Orbitrap Eclipse, está diseñado para poder trabajar con cromatografías rápidas y, por lo tanto, proporciona un análisis robusto y de alto rendimiento real, siendo ideal para aplicaciones clínicas de proteómica.
  Este nanoLC utiliza Evotips como columnas de trampa desechables, donde las muestras se cargan y desalinizan fuera de línea. El muestreador automático recoge la punta e integra la elución con la cromatografía líquida. Esto elimina los pasos de manipulación de muestras y reduce los gastos generales del ciclo de inyección. Se garantiza un desgaste mínimo de los componentes mecánicos, ya que toda la elución y la formación de gradientes se producen a baja presión. El Evotip se deja desechar después de cada análisis, lo que permite una elución parcial para prolongar la vida útil de la columna. Los péptidos analíticamente importantes se retienen de manera efectiva y se reduce la contaminación cruzada.

  El sistema Evosep facilita el análisis LC-MS/MS de un gran número de muestras para poder realizar de manera eficiente el análisis de cohortes de muestras en aplicaciones clínicas y traslacionales.

   

• Orbitrap Fusion Lumos (Thermo Scientific) (2016)La capacidad de la instalación se fortaleció significativamente con la adquisición en 2016 de este espectrómetro de masas tríbrido que incluye un cuadrupolo, una trampa de iones lineal y un analizador de masas Orbitrap. Este instrumento permite múltiples técnicas de fragmentación (CID, HCD y ETD) durante cualquier etapa de MSn, con análisis de masas posteriores en el analizador de masas con trampa de iones o Orbitrap.
  El instrumento aprovecha la combinación de una fuente de iones más brillante que los instrumentos Orbitrap anteriores, con un tubo de transferencia de mayor capacidad y un embudo de iones electrodinámico para una mayor sensibilidad. Cuenta con una guía avanzada de haz de iones activos para una mayor robustez, un cuadrupolo segmentado y una mejor transmisión de iones y rendimiento de ETD.
  La tecnología de vacío avanzada permite ajustar el vacío en la celda IRM para mejorar la transmisión de iones y S/N para proteínas intactas, así como para su fragmentación.
  Este instrumento se utiliza en las aplicaciones más exigentes de la proteómica, tanto en enfoques de arriba hacia abajo como de abajo hacia arriba. Se utiliza acoplado a dos sistemas nanoLC según el enfoque de MS: un sistema Dionex Ultimate 3000 nanoLC (Thermo) o un NanoAcquity UPLC de Waters. En ambos casos se utiliza una interfaz nanoESI basada en chip (Advion Triversa Nanomate).

• Sistema MS de alta definición Synapt (Waters-Micromass)Sistema MS de alta definición Synapt (Waters-Micromass) (2007). Instrumento híbrido QTOF con Triwave Cell incorporado. Este instrumento permite combinar la MS en tándem con la movilidad iónica, lo que permite el análisis de muestras diferenciadas no solo por su relación masa/carga, sino también por su forma y tamaño. El instrumento se utiliza para analizar la estructura macromolecular y la conformación de proteínas intactas y para estudiar interacciones no covalentes. Cuando funciona en su configuración normal, el instrumento está conectado a una interfaz nanoESI basada en chip (Advion Triversa Nanomate).

   

• Premier XELCT-Premier XE (Waters-Micromass) (2007). Espectrómetro de masas de tiempo de lucha con aceleración ortogonal ideal para el análisis de compuestos de alto peso molecular. Este instrumento ha sido modificado para lograr condiciones inertes dentro de la fuente de ionización, con el fin de permitir experimentos de intercambio H/D de amida para el estudio de las propiedades dinámicas y estructurales de las proteínas y sus complejos. En la configuración de configuración estándar, funciona acoplado a un dispositivo LC (UPLC Acquity, Waters), por ejemplo, análisis de proteínas grandes (mAbs).-

   

• Dispositivos complementarios
  La Instalación está equipada con los siguientes dispositivos complementarios, además de los sistemas cromatográficos ya mencionados:Un sistema Gelfree (electroforesis de atrapamiento de fracciones líquidas eluidas en gel) para la separación de proteínas: sistema de fraccionamiento Gelfree 8100 (Protein Discovery Inc.) (2010)